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紫外可見分光光度計的應用

發布日期:2023-05-24     作者:紫外可見分光光度計的應用     瀏覽:3642次

  UV-Vis已發現其適用于許多用途和情況,包括但不限于:

  1、DNA和RNA分析

  快速驗證RNA和DNA的純度和濃度是一種特別廣泛的應用。下表1中給出了分析中使用的波長及其指示的摘要。在制備DNA或RNA樣品時,例如用于測序等下游應用時,通常重要的是要驗證其中一個樣品沒有被其他,或從分離過程中攜帶的蛋白質或化學物質。

  260nm/280nm吸光度(260/280)比值可用于揭示核酸樣品中可能存在的污染,如下表2所示。純DNA的260/280比值通常為1.8,而純RNA的比值通常為2.0.純DNA的260/280比值低于RNA,因為在RNA中被尿嘧啶取代的胸腺嘧啶的260/280比值低于尿嘧啶。由于280nm處的吸光度較高,被蛋白質污染的樣品會降低260/280比值。

  260nm/230nm吸光度(260/230)比率也可用于檢查DNA和RNA樣品的純度,并可揭示蛋白質或化學污染。蛋白質可以吸收230nm的光,從而降低260/230比率并指示DNA和RNA樣品中的蛋白質污染。硫氰酸胍和異硫氰酸胍是純化核酸中常用的兩種化合物,在230nm處有強烈吸收,這也會降低260/230的吸光度比值。

  2、藥物分析

  UV-Vis光譜最常見的用途之一是在制藥行業。使用數學導數處理UV-Vis光譜允許解析原始光譜中的重疊吸收峰以識別單個藥物化合物。例如,苯佐卡因(一種局部麻醉劑)和金霉素(一種抗生素)可以通過將第一個數學導數應用于吸光度光譜,同時在商業獸用粉末制劑中進行鑒定。通過為每種化合物構建校準函數,可以在微克/毫升的濃度范圍內同時定量這兩種物質。

  3、細菌培養

  紫外可見分光光度計常用于細菌培養。OD測量通常使用600nm的波長快速進行,以估計細胞濃度并跟蹤生長。600nm是常用和優選的,因為它們在其中生長的細菌培養基的光學特性以及避免在需要繼續實驗的情況下損壞細胞。

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